目前我國水質(zhì)（糞）大腸菌群的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法
有多管發(fā)酵法和濾膜法，酶底物法自2006年列入
《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法》以來，便受到了檢測行
業(yè)內(nèi)的普遍關(guān)注[1～2]，相對于傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法，該
方法具有操作簡便，檢測時間短，染菌幾率低等優(yōu)
點[3]，且大量文獻(xiàn)證實多管發(fā)酵法與酶底物法在檢
測糞大腸菌群結(jié)果上沒有顯著性差異，方法沒有區(qū)
別，效果相同[4～8]。甚至有學(xué)者提出將酶底物法代替
多管發(fā)酵法列為標(biāo)準(zhǔn)方法，并且列為優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)檢驗
方法[9]。
然而由于酶底物法商品化培養(yǎng)基及其耗材的
價格昂貴，阻礙了其發(fā)展[10]。《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗
方法》中對酶底物法培養(yǎng)基的選擇規(guī)定“可選市售
商品化制品”同時提供了培養(yǎng)基的基本成分：硫酸
銨、硫酸錳等13種成分供實驗人員自己配制[11]，但是
由于該培養(yǎng)基實驗室配制的操作性不強和商品化
培養(yǎng)基的便利性，多數(shù)實驗人員仍傾向購買商品化
試劑，有行業(yè)人士提出酶底物法試劑的國產(chǎn)化有利
于該方法的推廣和發(fā)展[12]。
近年來國內(nèi)出現(xiàn)了價格低廉的同類制品，同為
酶底物法51孔和97孔MPN（*可能數(shù)，most probable
number）計數(shù)原理，本項試驗選取了國產(chǎn)商品化的
colitech試劑與進(jìn)口colilert試劑及其各自配套制品
（100mL取樣瓶，51孔和97孔定量盤） 檢驗水中總大
腸菌群和糞大腸菌群比較。
1 材料與方法
1.1 材料
國產(chǎn)colitech試劑、100mL無菌取樣瓶（含1.5%
的固體硫代硫酸鈉），51孔和97孔定量盤、2010A型
程控定量封口機均由西安立科環(huán)保科技有限公司
提供；進(jìn)口colilert試劑、100mL無菌取樣瓶（含1.5%
的固體硫代硫酸鈉）、51孔和97孔定量盤、2009D型
定量程控封口機均由美國愛德士公司提供。其它試
劑均按照標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法配制。標(biāo)準(zhǔn)菌種購于國家標(biāo)
準(zhǔn)物質(zhì)中心。
1.2 方法
用100mL無菌取樣瓶量取100mL水樣，加入酶
底物法試劑并搖勻溶解，倒入51孔或97孔定量盤，
趕出氣泡后用封口機封口，置于37℃±0.1℃或44.5℃
±0.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后以顯黃色為陽性原則判
讀結(jié)果，并對照相應(yīng)51孔或97孔MPN表計數(shù)。
兩種酶底物法監(jiān)測水中（糞）大腸菌群商品化制品的比較
張會強馬文鵬劉敏周弛張秦銘張佳音梁衛(wèi)東張宇
（陜西省環(huán)境監(jiān)測中心站陜西西安710051）
摘要：比較了進(jìn)口colilert試劑和國產(chǎn)colitech試劑及其各自配套制品對水中（糞）大腸菌群的檢測，包括總大腸菌群和糞
大腸菌群。分別使用同為酶底物法的兩種制品檢測地表水、地下水、水源水、生活飲用水及污水水樣，比較了兩種制品用于水中
（糞）大腸菌群檢測結(jié)果的一致性，同時驗證了兩種制品的無菌性和培養(yǎng)基的選擇性。試驗結(jié)果表明，進(jìn)口colilert試劑和國產(chǎn)
colitech試劑及其各自配套制品于水中（糞）大腸菌群檢測結(jié)果具有一致性，培養(yǎng)基具有很好的選擇性。
關(guān)鍵詞：酶底物法總大腸菌群糞大腸菌群酶底物colitech試劑
中圖分類號：X172 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：（G）01-0079（2014）-01-22-24-03
收稿日期：2013-11-01
作者簡介：張會強（1980-），男，河北晉州人，工程師，碩士，主要從事
微生物檢測與環(huán)境監(jiān)測工作。
分析測試（22~24）2 結(jié)果
2.1 無菌性測試
隨機抽取20套colitech和colilert制品（包括試劑、
100mL無菌取樣瓶、51孔和97孔定量盤各10個），對
經(jīng)121℃高壓蒸汽**20min 的無菌生理鹽水
（0.9%，w/v，氯化鈉溶液）進(jìn)行空白試驗，培養(yǎng)結(jié)果均
為“陰性”，說明兩種制品均符合無菌要求。
2.2 培養(yǎng)基性能測試
隨機抽取20套colitech和colilert試劑，按照培養(yǎng)
基陽性和陰性對照培養(yǎng)檢查試驗要求[13]，分別挑取
陽性和陰性標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株接種于事先溶解的兩種
試劑中。經(jīng)陽性菌株培養(yǎng)試驗，結(jié)果均呈“陽性”；而
陰性菌株培養(yǎng)試驗，結(jié)果呈“陰性”，說明兩種培養(yǎng)
基均符合總大腸菌群和糞大腸菌群檢測要求。選取
的有證標(biāo)準(zhǔn)菌株及檢驗結(jié)果如表1。
表1 標(biāo)準(zhǔn)菌株檢驗
編號菌株名稱菌株編號總大腸菌群糞大腸菌群
培養(yǎng)溫度： 培養(yǎng)溫度：
37℃±1℃ 44.5℃±0.5℃
1 大腸埃希氏菌ATCC 25922 陽性陽性
2 金黃色葡萄球菌ATCC 25923 陰性/
3 產(chǎn)氣腸桿菌CCTCC AB200052 陽性陰性
4 銅綠假單胞菌CGMCC 1.2387 陰性/
5 糞鏈球菌ATCC 29212 / 陰性
2.3 檢驗結(jié)果比較
分別利用進(jìn)口colilert試劑和國產(chǎn)colitech試劑對
88份水樣（含地表水、地下水、水源水、生活污水）進(jìn)
行總大腸菌群和糞大腸菌群的檢驗，結(jié)果分別如圖
1和圖2。
1g（mpn/L）
樣品編號
圖1 進(jìn)口colilert試劑和國產(chǎn)colitech
試劑檢測總大腸菌群的比對數(shù)據(jù)
對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行配對t 檢驗，配對樣本t 檢驗
前提條件是數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，因此需要對數(shù)據(jù)進(jìn)
行對數(shù)處理后（lg（MPN/L））利用SPSS18.0統(tǒng)計軟件
進(jìn)行配對t 檢驗[14]，分析結(jié)果見表2。
表2 總大腸菌群檢測數(shù)據(jù)配對t檢驗結(jié)果
成對差分
均標(biāo)準(zhǔn)均值的標(biāo)準(zhǔn)
值差誤差
colitech
試劑
-colilert
試劑
差分的95%
置信區(qū)間
t df Sig.(雙側(cè)) 下限上限
-.001261 .172333 .018371 -.037775 .035253 -.06987 .945
1g（mpn/L）
樣品編號
圖2 進(jìn)口colilert試劑和國產(chǎn)colitech
試劑檢測糞大腸菌群的比對數(shù)據(jù)
按照上述的數(shù)據(jù)處理方法，利用SPSS18.0統(tǒng)計
軟件對兩組糞大腸菌群的結(jié)果進(jìn)行配對t 檢驗，結(jié)
果見表3。
表3 糞大腸菌群檢測數(shù)據(jù)配對t檢驗結(jié)果
成對差分
均標(biāo)準(zhǔn)均值的標(biāo)準(zhǔn)
值差誤差
colitech
試劑
-colilert
試劑
差分的95%
置信區(qū)間
t df Sig.(雙側(cè)) 下限上限
-.0102841 .1898333 .0202363 -.0299377 .0505059 -.508 87 .613
兩種試劑對總大腸菌群檢測數(shù)據(jù)配對t檢驗結(jié)
果顯示，其P-值大于顯著性水平，即：Sig.=0.945>
0.05，兩種試劑對糞大腸菌群監(jiān)測數(shù)據(jù)配對t檢驗結(jié)
果顯示，其P-值大于顯著性水平，即：Sig.=0.613>
0.05，因此進(jìn)口colilert試劑和國產(chǎn)colitech試劑對總
大腸菌群和糞大腸菌群的檢測結(jié)果沒有顯著差異。
2.4 生活飲用水（自來水）的檢驗
平行選取10份實驗室自來水進(jìn)行糞大腸菌群
的檢驗，由于自來水為加氯水樣，應(yīng)使用100mL取樣
瓶中的固體硫代硫酸鈉去除自來水中的余氯后進(jìn)
行檢驗，為了檢驗余氯的去除效果，其中6～10號水
樣經(jīng)去除余氯后進(jìn)行了加標(biāo)試驗，結(jié)果如表4。
表4 自來水去除余氯后檢驗結(jié)果
colitech試劑colilert試劑
51孔板97孔板51孔板97孔板
1 ND ND ND ND
2 ND ND ND ND
3 ND ND ND ND
4 ND ND ND ND
5 ND ND ND ND
6 2.0 2.0 3.1 1.0
7 16.4 14.8 13.7 16.0
8 7.5 9.8 6.4 8.5
9 11.1 17.5 11.1 13.5
10 42.9 29.9 45.3 35.5
樣本序號
表4中，“ND”表示未檢出，即檢驗結(jié)果呈全
陰性。
3 討論
以上試驗分別在無菌性，培養(yǎng)基的選擇性，檢
測結(jié)果的一致性，加氯水樣的適用性方面對比了國
產(chǎn)colitech和進(jìn)口colilert酶底物法大腸菌群檢測制
品，培養(yǎng)基和實驗用器皿的無菌性是微生物檢驗前
提，兩套制品均可達(dá)到實驗的無菌要求；培養(yǎng)基的
假陽性和假陰性會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，酶底物
法優(yōu)于多管發(fā)酵法的重要原因就是酶和底物的特
異性反應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)比單純依靠酸堿指示劑的變色和細(xì)
菌的產(chǎn)氣特性（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）準(zhǔn)確性高，標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗
證實兩種培養(yǎng)基對大腸桿菌類具有選擇性；對多種
類型的水樣檢驗結(jié)果的一致性進(jìn)一步驗證同為酶
底物法的兩種制品對（糞）大腸菌群的定量檢測效
果相同；對自來水的試驗結(jié)果表明：一方面通過加
氯**的自來水無糞大腸菌群檢出證實了培養(yǎng)基
無假陽性，另一方面自來水消除余氯后的加標(biāo)試驗
檢出，驗證了兩種培養(yǎng)基對糞大腸菌群檢測的具有
相同靈敏性，《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對生活飲用水
規(guī)定“不得檢出”[15]，因此“檢出”和“未檢出”意義重
大，試驗證實兩種培養(yǎng)基均可避免出現(xiàn)大腸菌群檢
出誤報的風(fēng)險。
國產(chǎn)colitech相對于進(jìn)口colilert酶底物法大腸菌
群檢測制品價格低廉，可降低檢測機構(gòu)的檢測成
本，對擺脫依賴進(jìn)口和酶底物法的推廣具有重要意
義。在國家倡導(dǎo)厲行節(jié)約的環(huán)境下，通過科技研發(fā)
形成具有自主知識產(chǎn)權(quán)高科技檢測制品，可以極大
節(jié)約事業(yè)型檢測機構(gòu)的公費開支。
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生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法、日常生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法、生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法的詳細(xì)說明
文章來源于西安立科環(huán)保科技有限公司